Mikrobiologiske metoder til vand, jord, luft

Mikroorganismer er de mindste, mest forædlede væsner, udbredt i naturen. De findes i alle miljøer (luft, jord, vand), i menneskekroppen og dyrene, i planter.

Den kvalitative diversitet og antallet af mikroorganismer afhænger primært af ernæringsmæssige forbindelser. Men luftfugtighed, temperaturregulering, beluftning, virkningen af solstråler og andre faktorer er også af stor betydning.

природных сред позволяют выявить наличие патогенных микроорганизмов, определить их количество и, в соответствии с полученными результатами, выработать меры по устранению или предупреждению инфекционных заболеваний. Metoder til sanitær-mikrobiologisk undersøgelse af naturlige medier gør det muligt at identificere forekomsten af patogene mikroorganismer, bestemme deres antal og i overensstemmelse med de opnåede resultater udvikle foranstaltninger til eliminering eller forebyggelse af smitsomme sygdomme. Derudover er kvantitative regnskaber nødvendige for modellering af økosystemer og udvikling af principper for styring af naturlige processer. . Lad os overveje, hvad er metoderne til mikrobiologisk forskning .

jord

Det betragtes af forskere som en af de mulige måder at overføre infektiøse patologier på. Ved udskillelse af syge mennesker eller dyr trænger patogene mikroorganismer ned i jorden. Nogle af dem, især spore, kan overleve i jorden i lang tid (nogle gange flere årtier). позволяют определить "микробное число" (кол-во микроорганизмов в грамме грунта), а также коли-индекс (количество кишечных палочек). Patogener af sådanne farlige infektioner, såsom stivkrampe, miltbrand, botulisme mv. Kommer ind i jorden. Metoder til jordbundens sundhedsmikrobiologiske undersøgelse gør det muligt at bestemme "mikrobialtalet" (antal mikroorganismer i et gram jord) samt coli-indekset (antallet af E. coli) .

Jordanalyse: generel information

следует в первую очередь отнести прямое микроскопирование и посев на плотную питательную среду. Metoderne til mikrobiologisk jordforskning skal først og fremmest omfatte direkte mikroskopi og såning på et tæt næringsmedium. Populationer af mikroorganismer og deres grupper beboer jorden varierer i deres taksonomiske position og økologiske funktioner. I videnskab er de forenet under det generelle udtryk "jordbiota". Jord er levested for et stort antal mikroorganismer. I et gram jord er der fra 1 til 10 mia. Af deres celler. I dette miljø fortsætter nedbrydning af organiske stoffer med deltagelse af forskellige saprofytiske mikroorganismer.

Mikroskopisk metode til mikrobiologisk forskning: stadier

Analysen af miljøet begynder med prøveudtagning. For at gøre dette skal du bruge en tidligere rengjort og gnidet alkoholkniv (du kan bruge en skovl). Herefter fremstilles prøven. Det næste trin er tællingen af celler på farvede udstrygninger. Lad os overveje hvert trin separat.

Sampling

Ved analysering af dyrkbar jord tages der som regel prøver ud fra dybden af hele laget. Fjern først 2-3 cm fra toppen af jorden, da det kan indeholde fremmed mikroflora. Herefter tages monolitter fra jordens undersøgte sted. Længden af hver af dem skal svare til tykkelsen af laget, hvorfra du skal tage en prøve.

På en grund på 100-200 kvadratmeter. M, 7-10 prøver tages. Vægten af hver er ca. 0,5 kg. Prøverne skal blandes grundigt i en pose. Herefter skal du tage en gennemsnitlig prøve på ca. 1 kg. Den skal placeres i en pergament (steril) taske, indlejret i en vævspose. Før direkte analyse opbevares prøven i køleskabet.

Forberedelse til forskning

Den blandede jord hældes på det tørre glas. Foreløbigt skal det tørres med alkohol og brændes over brænderen. Ved hjælp af en spatel blandes jorden grundigt og udlægges jævnt. Uden fejl er det nødvendigt at fjerne rødder, andre yderlige elementer. Til dette benyttes pincet. Før arbejdet bliver pincet og spatel kalcineret over brænderen og afkølet.

Fra små dele af jorden fordelt over glasset tages små portioner. De vejes i en porslinskål i teknisk skala. является специальная обработка образца. En obligatorisk fase af mikrobiologisk metode til mikrobiologisk undersøgelse er speciel behandling af prøven. Det er nødvendigt at forberede 2 sterile kolber på forhånd. Deres kapacitet bør ikke overstige 250 ml. 100 ml ledningsvand hældes i en af kolberne. Fra det tager 0,4-0,8 ml væske og fugter jordens hængning til en pastaagtig tilstand. Blandingen skal gnides med en finger eller en gummipestel i 5 minutter.

Med vand fra den første kolbe overføres jordmassen til en tom kolbe. Så gnides det igen. Herefter overføres massen til kolben nær brænderens flamme. Beholderen med jord suspensionen er rystet på vippen i 5 minutter. Derefter bliver det løst i omkring 30 sekunder. Dette er nødvendigt for at store partikler skal kunne klare sig. Efter et halvt minut bruges massen til at forberede præparatet.

Celltælling på faste udstrykninger

, разработанному Виноградским. Direkte mikroskopisk undersøgelse af jorden udføres ifølge metoden for mikrobiologisk forskning udviklet af Vinogradsky. I et bestemt volumen af den fremstillede suspension tælles antallet af mikroorganismeceller. Undersøgelsen af faste udstødninger giver dig mulighed for at redde narkotika i lang tid og udføre beregninger til enhver passende tid.

Fremstilling af lægemidlet er som følger. Et vist volumen af suspensionen (sædvanligvis 0,02-0,05 ml) påføres ved anvendelse af en mikropipette på et dias. En dråbe agar-agaropløsning (agaropektinpolysaccharidblandinger og agarose ekstraheret fra brunt og rødt tang af Sortehavet) tilsættes til det, blandes hurtigt og fordeles på et område på 4-6 kvadratmeter. Se Smøret tørres i luft og fastgøres i 20-30 minutter. Alkohol (96%). Dernæst fugtes præparatet med destilleret vand, der anbringes i carbolisk erythrosinopløsning i 20-30 minutter.

Efter farvning vaskes den og tørres i luft. Cellerne tælles med et nedsænkningsmål.

Såning på tætte medier

позволяют выявить большое количество микроорганизмов. Mikroskopiske metoder til mikrobiologisk forskning gør det muligt at identificere et stort antal mikroorganismer. Men på trods af dette anses metoden til såning som den mest almindelige i praksis. Dens essens består i såning af præparatets volumen (jord suspension) i en petriskål på et tæt medium.

позволяет учитывать не только количество, но и групповой, а в ряде случаев и видовой состав микроскопической флоры. Denne metode til mikrobiologisk forskning gør det muligt for os at tage ikke kun mængden i betragtning, men også gruppesammensætningen og i nogle tilfælde artens sammensætning af den mikroskopiske flora. Antallet af kolonier er normalt lavet fra bunden af petriskålen i transmitteret lys. På den beregnede sektion placeres prikken med en markør eller et blæk.

Vandanalyse

Mikrofloraen af et vandlegeme afspejler som regel den jordbaserede mikrobielle sammensætning. имеют особое практическое значение при изучении состояния конкретной экосистемы. I den henseende er metoderne til sanitær og mikrobiologisk undersøgelse af vand og jord af særlig praktisk betydning for at studere tilstanden i et bestemt økosystem. Friske damme indeholder som regel kokos, stavformede bakterier.

Anaerober i vand findes i små mængder. Som regel reproducerer de i bunden af reservoirerne, i silt, der deltager i rensningsprocesserne. Mikrofloraen af oceanerne og havene er hovedsageligt repræsenteret af salt-elskende (halofile) bakterier.

Næsten ingen artesiske brønde findes i mikroorganismer. Dette skyldes jordlagets filtreringsevne.

считаются определение микробного числа и коли-титра либо коли-индекса. De generelt accepterede metoder til mikrobiologisk vandprøvning er bestemmelsen af det mikrobielle tal og colitis eller coliformindekset. Den første indikator karakteriserer antallet af bakterier i 1 ml væske. Coli-indekset er antallet af E. coli til stede i en liter vand, og colite-titeren er den mindste mængde eller maksimale fortynding af væsken, hvori de stadig kan detekteres.

Bestemmelse af det mikrobielle nummer

Denne metode til sanitær mikrobiologisk vandforskning er som følger. I 1 ml vand bestemmes mængden af fakultative anaerobe og mesofile (mellemliggende) aerober, der er i stand til kød-agiteret agar (hoved næringsmediet) ved 37 ° C. I løbet af dagen for at danne kolonier, synlig med en stigning på 2-5 r. Eller med det blotte øje.

является посев. Nøglefasen af denne metode til mikrobiologisk vandforskning er såning. Fra hver prøve sås mindst 2 forskellige mængder. Ved analyse af ledningsvand tilsættes 1-0,1 ml ren væske til hver kop og 0,01-0,001 ml forurenet væske. Ved såning 0,1 ml eller mindre fortyndes væsken med destilleret (sterilt) vand. Konsekvent udarbejde tifoldige fortyndinger. 1 ml af hver af dem tilsættes til to petriskåle.

Fortyndingerne er fyldt med næringsstofagar. Det skal forsmeltes og afkøles til 45 grader. Efter aktiv omrøring forlades mediet på en vandret overflade for at størkne. Ved 37 grader. Afgrøder dyrkes hele dagen. позволяет учитывать результаты на тех чашках, где количество колоний находится в пределах от 30 до 300. Metoden for mikrobiologisk vandforskning under overvejelse gør det muligt at tage hensyn til resultaterne på de plader, hvor antallet af kolonier ligger i området fra 30 til 300.

luft

Det betragtes som et transitmedium til mikroorganismer. являются седиментация (оседание) и аспирация. De vigtigste metoder til mikrobiologisk undersøgelse af luft er sedimentering (sedimentering) og aspiration.

Mikrofloraen i luftmiljøet er betinget opdelt i en variabel og en konstant. Den første omfatter gær, pigmentdannende cocci, sporiferbaciller, stænger og andre mikroorganismer, resistente over for tørring, lyseksponering. Repræsentanter for den variable mikroflora, der trænger ind i luften fra deres sædvanlige habitat, varer ikke længe deres levedygtighed.

I luften af store megaciteter er mikroorganismer meget mere end i luftmiljøet i landdistrikterne. Over havene er bakteriernes skove meget få. Fjernelse af luft er lettere ved nedbør: sne og regn. I lukkede lokaler af mikrober meget mere end i åbne rum. Deres antal stiger i vinterperioden i fravær af regelmæssig luftning.

sedimentering

считается простейшим. Denne metode til mikrobiologisk forskning i mikrobiologi betragtes som den enkleste. Det er baseret på sedimentering af dråber og partikler på overfladen af agaren i en åben petriskål under tyngdekraften. Sedimentationsmetoden bestemmer ikke nøjagtigt antallet af bakterier i luften. Faktum er, at det er ret vanskeligt at fange små fraktioner af støvpartikler og bakteriedråber på en åben kop. Primært store partikler bevares på overfladen.

Denne metode anvendes ikke i analysen af atmosfærisk luft. Dette miljø er kendetegnet ved store udsving i luftstrømens hastighed. Sedimentation kan imidlertid anvendes i mangel af mere sofistikerede instrumenter eller en kilde til elektricitet.

Bestemmelse af det mikrobielle tal udføres ved metoden af Omelyansky. I overensstemmelse med det, i 5 minutter på overfladen af agar med et areal på 100 kvadratmeter. Cm afregner antallet af bakterier, der er til stede i 10 liter luft.

Ordre 535 "Om forening af mikrobiologiske metoder til forskning"

Bakteriologisk analyse indtager et vigtigt sted i en kompleks klinisk og laboratorieaktivitet rettet mod diagnose, forebyggelse og behandling af en række infektionssygdomme. Men de er ikke begrænset til miljøforskning.

Af særlig betydning er den bakteriologiske analyse af biologisk materiale i medicinske institutioner. Til forskningen i medicinske institutioner er der rejst krav. Formålet med bekendtgørelsen "Om forening af mikrobiologiske metoder til forskning" er at forbedre bakteriologisk analyse, forbedre kvaliteten og effektiviteten af mikrobiologisk diagnose.

Mikroskopisk undersøgelse af udslæt hos kvinder

Det er en vigtig analysemetode ved diagnosticering af seksuelt overførte infektioner og opportunistiske sygdomme (forårsaget af opportunistiske bakterier).

Mikroskopisk analyse gør det muligt at vurdere den kvalitative og kvantitative sammensætning af mikroflora, kontrollere korrekt prøvetagning. For eksempel indikerer tilstedeværelsen af vaginal epithel i et smear taget fra livmoderhalsen en overtrædelse af de biologiske prøveudtagningsregler.

Det er værd at sige, at den mikrobiologiske undersøgelse i dette tilfælde generelt ledsages af visse problemer. De er forbundet med, at der i de nedre dele af kønsorganerne normalt er en forskellig mikroflora, der varierer i forskellige aldersperioder. For at forbedre undersøgelsens effektivitet blev der udviklet ensartede regler.

Diagnose af virale infektioner

Det udføres ved metoder til påvisning af RNA- og DNA-patogener. De er primært baseret på bestemmelsen af nukleotidsekvenser i patologisk materiale. Til dette formål anvendes molekylære prober. De er kunstigt producerede nukleinsyrer, der er komplementære til virussyrer mærket med en radioaktiv mærkning eller biotin.

Et særligt træk ved fremgangsmåden er multipelkopiering af et specifikt DNA-fragment, som omfatter flere hundrede (eller tiere) nukleotidpar. Replikationsmekanismen (kopiering) er, at færdiggørelsen kun kan begynde i bestemte blokke. For at oprette dem anvendes primere (primere). De er syntetiserede oligonukleotider.

PCR-diagnostik (polymerasekædereaktion) er let at udføre. Denne metode giver dig mulighed for hurtigt at opnå et resultat ved hjælp af en lille mængde patologisk materiale. Ved hjælp af PCR-diagnostik påvises akutte, kroniske og latente (skjulte) infektioner.

Med følsomhed anses denne metode for at være foretrukket. Imidlertid er testsystemerne i øjeblikket ikke pålidelige nok, så PCR-diagnostik ikke helt kan erstatte de traditionelle metoder.